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技術文章

什么因素會影響ELISA試劑盒的質(zhì)保?

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 影響ELISA試劑盒質(zhì)保的因素:
  1.辦法學的影響
  ELISA測定形式包含以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法,其間競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等選用)因受操作時差所引起的競爭等要素的影響,成果重復性較差,質(zhì)量較難操控。
  2.試劑要素
  不同批次的ELISA試劑在制作進程中很難保證質(zhì)量*一致,即使是通過批批檢的項目其檢測成果也存在差異,因而必須挑選和訂購長批號的試劑,并保證保存條件。嚴格執(zhí)行這一規(guī)范可以防止因試劑批號改動而從頭建立質(zhì)控體系及從頭評估試劑的雜亂進程,并且能夠保證成果的穩(wěn)定性;關于效期短、使用率低的試劑,應當小量分裝,每次使用則取分裝部分即可,防止重復凍融造成試劑的失效。
  3.樣本要素
  標本攪擾要素包含內(nèi)源性攪擾要素和外源性攪擾要素,前者包含類風濕因子、補體、異嗜性抗體、本身抗體、溶菌酶等,后者包含標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存時刻過長、標本凝結(jié)不全、冷凍標本的重復凍融等。
  4.操作要素
  ELISA操作步驟雜亂,操作不當將引起較大的差錯。加樣、溫育、洗刷、顯色、比色。
  5.灰區(qū)的設置
  通常情況下,ELISA定性試驗以“陽性”和“陰性”來報告成果,兩者間有一條分界線被稱為“陽性判別值”(cut-off value,CO值),這是定性免疫測定成果報告的根據(jù)。
  6.標本復查
  ELISA手工檢測進程雜亂,影響要素較多,即使室內(nèi)質(zhì)控在控,也或許因孔間差異而造成成果的差異,因而加大復查力度是保證成果準確性的牢靠辦法,比如對HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項目的可疑、弱陽性標本及罕見形式的檢測成果進行復查。
  7.常表明成果的常用辦法
  a.定性測定
  b.半定量測定 成果一般以滴度表明。
  c.定量測定 即用已知量的規(guī)范品作一系列稀釋后進行ELISA測定,制作規(guī)范曲線,成果以肯定量或單位表明。在ELISA定量檢測中每一塊反應板都必須制作相應的規(guī)范曲線。
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